Lignes directrices en matière de biosécurité en laboratoire : 3e édition 2004

Chapitre 5
Mise en service, accréditation et renouvellement d'accréditation des laboratoires des niveaux de confinement 3 et 4

5.1 Introduction

Aux fins de ce document, la « mise en service » signifie la vérification de la construction et de la performance des éléments essentiels de confinement et constitue une partie de l'ensemble des procédures d'accréditation. L'« accréditation » marque la réussite de la mise en service et atteste la conformité des installations et des protocoles opérationnels aux exigences énoncées dans ce document. Le « renouvellement d'accréditation » confirme que les installations respectent toujours les exigences de cette version des Lignes directrices ainsi que les procédures de renouvellement d'accréditation définies dans ce chapitre.

5.1.1 Mise en service

Les procédures de mise en service visent à s'assurer que les installations, les appareils et les systèmes finals sont conformes à leur conception et aux plans et devis de construction. Il est préférable d'implanter ces procédures au début de l'étape de planification et de vérifier leur conformité pendant la construction et jusqu'à l'obtention de l'accréditation.

Pour s'assurer du respect des critères de conception des niveaux de confinement prévus et de la conformité d'utilisation du laboratoire, les installations doivent suivre un plan de mise en service détaillé entraînant la vérification et la documentation des éléments essentiels du confinement, la mise en marche des appareils, le calibrage du système de surveillance, l'équilibrage des pressions et le contrôle des performances. S'inscrivent dans ce processus un cahier des charges exhaustif et un jeu complet de dessins, une bonne compréhension de l'utilisation des installations et du travail prévu, une liste des exigences associées aux appareils, tous les résultats des tests et une intelligence de la finalité du fonctionnement des systèmes. La mise en service est une exigence préalable à l'accréditation des laboratoires de niveaux de confinement 3 et 4.

5.1.2 Accréditation

Ce chapitre propose une matrice des éléments essentiels de confinement qu'il convient de vérifier à l'étape initiale de l'accréditation. Il est également important d'établir des protocoles opérationnels avant de manipuler des agents pathogènes dans le laboratoire de niveau de confinement approprié. La formation du personnel est un aspect crucial de ce processus qui peut comprendre un travail initial avec des agents pathogènes généralement manipulés dans des zones de confinement moins élevé. Les utilisateurs doivent non seulement comprendre les procédures scientifiques, mais aussi le fonctionnement des systèmes de confinement. Des registres détaillés du processus d'accréditation et des résultas des tests doivent être tenus à jour.

5.1.3 Renouvellement d'accréditation

Le renouvellement d'accréditation est une étape qui concerne certains éléments du confinement. Toutes sortes de facteurs influencent la nature et la fréquence de cette démarche. Ainsi, la vérification du courant d'air directionnel, la détection visuelle des fuites dans le périmètre de la zone, le recalibrage des jauges et des régulateurs cruciaux et la surveillance de l'efficacité des systèmes de stérilisation, tels que les autoclaves, sont des mesures qui peuvent être prises de façon routinière sans nuire au fonctionnement du laboratoire de confinement. Les informations relatives à la nécessité et à la fréquence de remplacement des filtres sont obtenues par la surveillance de la résistance au travers de ces filtres HEPA (c.-à-d. au moyen de jauges de pression) installés dans les systèmes de traitement d'air. S'il convient de vérifier l'intégrité du périmètre de la salle et des conduites d'air après un changement structurel, il est cependant inutile de vérifier à nouveau les caractéristiques de sûreté intégrée des systèmes de surveillance de CVC en provoquant des pannes si celles-ci n'ont pas été mises à niveau ou si leur conception n'a pas été modifiée.

5.2 Intégrité de la pièce

Des tests à l'aide de poires à fumée peuvent être faits pour vérifier l'intégrité d'une zone de confinement et détecter les fuites de périmètre. Tous les joints, tous les angles et toutes les pénétrations scellées pouvant entraîner une solution de continuité doivent être inspectés. Des tests de perte de pression destinés à vérifier l'intégrité de la zone de confinement confirmeront l'étanchéité du périmètre (c.-à-d. la possibilité que les gaz et les liquides ne traversent la membrane du périmètre et ne s'échappent des perforations prévues pour les services).

Légende : - obligatoire - recommandé

5.2.1 Matrice 6
Intégrité de la pièce

Matrice 6	Niveau de confinement		Intégrité de la pièce
	3	4
1			L'étanchéité des aires de confinement doit être vérifiée visuellement et avec une poire à fumée ou un autre moyen visuel. Faites l'inspection des murs, des planchers et des plafonds pour voir s'il y des fentes, des ébréchures ou de l'usure. Vérifiez l'étanchéité des murs et des planchers ainsi que les joints des murs et des plafonds. Critères d'acceptation : dans le but de confirmer l'étanchéité de toutes les pénétrations (c.-à-d. l'équipement et les services, entre autres) et des joints (c.-à-d. autour des portes, des fenêtres et des auto-claves, entre autres) à la barrière de confinement.
2			Vérification de l'intégrité du confinement par test de perte de pression. Critères d'acceptation : deux tests consécutifs avec une perte de pression minimum de 250 Pa (1 pouce colonne d'eau) par rapport à une pression initiale de 500 Pa (2 pouces colonnes d'eau) pendant 20 minutes(1). Test facultatif lors du renouvellement d'accréditation lorsqu'aucun changement n'a modifié l'intégrité du laboratoire, sous réserve d'une inspection visuelle de la membrane de la barrière de confinement. Au cas où l'inspection visuelle mettrait en doute l'intégrité du périmètre, l'exigence de test de perte de pression doit être établie en consultation avec le responsable du laboratoire, le responsable de la biosécurité/comité institutionnel de biosécurité.

5.2.2 Test de perte de pression

Procédures de base de test de perte de pression en cas de pression négative :

• Isoler la zone en fermant et fixant solidement toutes les portes et valves ainsi que les volets à scellant hermétique à la barrière de confinement (éviter de prendre des mesures de scellement temporaires pour les portes, les fenêtres et les services qui couvriraient les scellants permanents et empêcheraient les tests de fuite). Capuchonner toutes les conduites des manomètres Magnehelic, etc.
• Installer un manomètre calibré incliné à travers la barrière de confinement de manière à ce que celui-ci ne soit pas influencé par la distribution d'air. Le manomètre doit avoir une précision minimale de 10 Pa (0,05 pouce colonne d'eau) et pouvoir lire une pression allant jusqu'à 750 Pa (3 pouces colonnes d'eau)⁽¹⁾.
• Installer un robinet à bille dans la tuyauterie entre le ventilateur/pompe à vide et la pièce pour que la zone puisse être scellée une fois la pression nécessaire obtenue.
• Brancher la pièce à une pompe à vide pour créer un différentiel de pression négative de 500 Pa (2 pouces colonnes d'eau). Laisser stabiliser et fermer le robinet entre le ventilateur/pompe à vide et la pièce pour sceller la zone à 500 Pa (2 pouces colonnes d'eau).
• Mesurer la perte progressive de pression négative de 500 Pa (2 pouces colonnes d'eau). Enregistrer le différentiel de pression toutes les minutes pendant 20 minutes.
• Attendre 20 minutes pour effectuer un deuxième test, si nécessaire.
• Arrêter le ventilateur/pompe à vide et ouvrir lentement le robinet à bille pour faciliter le retour à une pression normale.
• Si le taux de fuite dépasse la valeur acceptée :
  • pressuriser la pièce à un niveau adéquat pour localiser les fuites,
  • tout en conservant une pression positive continue, appliquer une solution bulleuse aux sections devant être évaluées (joints, angles, pénétrations scellées pouvant entraîner une solution de continuité, etc.) ou localiser les fuites à l'oreille à l'aide d'une méthode sonore (p. ex., équipement de détection électronique des sons),
  • repérer les endroits où se forment les bulles,
  • réparer la ou les fuites avant de refaire un test.

5.3 Systèmes de traitement de l'air

Plusieurs éléments du système de traitement de l'air d'une zone de confinement doivent être vérifiés avant la mise en service. Les flux d'air des enceintes de sécurité biologique doivent être conformes aux exigences des fabricants, et l'intégrité des filtres HEPA doit être vérifiée pour s'assurer que le matériau filtrant, le joint d'étanchéité et le scellant du boîtier du filtre ne fuient pas. La vérification de la qualité du filtre se fait à l'aide d'une concentration connue de particules et d'une méthode de balayage du pourcentage de leur rétention en aval après filtration. Les conduites doivent être testées contre la perte de pression afin de vérifier que le taux de fuite n'est pas dépassé. Les procédures de test d'étanchéité des conduites et des plénums sont énoncés dans la norme N510 de Testing of Nuclear Air Treatment Systems publié en 1989 par l'American Society of Mechanical Engineers (ASME, confirmée en 1995⁽²⁾ ). Les performances des systèmes de contrôle de pression des zones doivent être conformes à leur conception (c.-à-d. maintien des pressions négatives).

Pour obtenir leur accréditation, les laboratoires doivent se conformer aux exigences de test et aux critères d'acceptation suivants.

5.3.1 Matrice 7
Systèmes de traitement de l'air

Matrice 7	Niveau de confinement		Systèmes de traitement de l'air
	3	4
1			Tests des enceintes de sécurité biologique de niveaux 1 et 2 effectués sur place, conformément aux normes NSF/ANSI 49-2002(3) ou CSA-Z316.3-95(4).
2			Tests des enceintes de sécurité biologique de niveau 3 effectués sur place, conformément au Laboratory Safety Monograph , normes NIH 1979(5) et BS EN 12469:2000(6).
3			Vérification des dispositifs de verrouillage réciproque (ventilateur intérieur de l'arrivée d'air des enceintes de sécurité biologique de classe II B2 et le ventilateur d'évacuation d'air) pour s'assurer de l'arrêt du ventilateur d'arrivée d'air en cas de panne du ventilateur d'évacuation, conformément aux normes NSF/ANSI 49-2002(3).
4			Vérification des avertisseurs des enceintes de sécurité biologique et/ou des avertisseurs de panne des ventilateurs d'évacuation d'air par simulation des conditions d'urgence.
5			Vérification sur place de l'intégrité des filtres HEPA installés dans l'arrivée d'air (mesure de protection en cas de refoulement d'air) et vérification sur place des conduites d'évacuation d'air (utilisation d'une concentration connue de particules) selon une méthode de balayage conforme à la norme IEST-RP-CC-006.2 (article 6.2)(7). Critères d'acceptation : la pénétration des particules ne doit pas dépasser 0,01 %. La vérification par balayage des petits filtres en ligne ne doit pas nécessairement être faite sur place. Prévoir dans le programme d'entretien une inspection visuelle et le remplacement régulier de ces filtres.
6			Vérification sur place de l'intégrité des boîtiers des filtres HEPA d'arrivée d'air lorsque ces filtres servent de mesure de protection en cas de refoulement d'air et sont munis de volets à scellants hermétiques d'entrée et de sortie; vérification sur place des conduites d'évacuation d'air par test de perte de pression. Ces deux tests seront faits conformémentà la norme N510 de l'ASME(2). Critères d'acceptation : taux de fuite d'air inférieur ou égal à 0,1 % du volume de la conduite par minute pour un test de pression minimal à 1000 Pa (4 pouces colonnes d'eau). Test facultatif pour le renouvellement d'accréditation lorsqu'aucune modification n'a eu lieu depuis celle-ci. Dans le cas contraire, le responsable du laboratoire devra, en consultation avec le responsable de la biosécurité/comité institutionnel de biosécurité, évaluer l'ampleur de ces changements et décider de la pertinence du test.
7			Vérification sur place des conduites d'arrivée d'air lorsqu'une protection antireflux est requise sur les conduites; vérification sur place des conduites d'évacuation situées entre le périmètre de confinement et les filtres HEPA ou le volet à scellant hermétique antireflux. Ces deux tests seront faits par méthode de perte de pression, conformément à la norme N510 de l'ASME(2). Critères d'acceptation : taux de fuite d'air inférieur ou égal à 0,1 % du volume de la conduite par minute pour un test de pression minimal à 1000 Pa (4 pouces colonnes d'eau).
8			Vérification des conduites d'arrivée et d'évacuation d'air placées entre le périmètre de confinement et le filtre HEPA ou le volet à scellant hermétique antiretour par test de perte de pression, conformément à la norme N510 de l'ASME(2). Critères d'acceptation : taux de fuite d'air inférieur ou égal à 0,1 % du volume de la conduite par minute pour un test de pression minimal à 1000 Pa (4 pouces colonnes d'eau).
9			Vérification facultative des pertes de pression des conduites d'arrivée et d'évacuation d'air pour le renouvellement d'accréditation lorsqu'aucune modification n'a été faite. Dans le cas contraire, le responsable du laboratoire évaluera, en consultation avec le responsable de la biosécurité/comité institutionnel de biosécurité, l'ampleur des changements et les mesures à prendre.
10			Vérification des pressions relatives entre les zones adjacentes (vestiaire « propre » et « sale », vestiaire « sale » et laboratoire). Critères d'acceptation : démonstration visuelle du courant d'air directionnel se déplaçant de l'extérieur vers la zone de confinement (en situation normale), par exemple en utilisant une poire à fumée à chaque porte menant vers des aires adjacentes).
11			Les systèmes de contrôle doivent être soumis à des essais au moyen de l'échec des composantes du système en vue de vérifier leur fonctionnementà sécurité intégrée (c.-à-d., panne du ventilateur d'extraction, panne du ventilateur de soufflage, panne de courant [où c'est possible], défaillance quant à l'extraction des enceintes de sécurité biologique de classe II B2). Cette vérification comprend celle des avertisseurs visuels et sonores. Critères d'acceptation : écoulement de l'air vers l'intérieur. Le changement de direction de l'écoulement de l'air qui traverse la barrière de confinement est à éviter. Test facultatif pour le renouvellement d'accréditation lorsqu'aucune modification n'a été effectuée auprès de l'équipement et de la logique du système de contrôle. Si des modifications ont été effectuées ou si des problèmes fréquents reliés au système de contrôle et des pannes sont survenus, alors le responsable du laboratoire devra, en consultation avec le responsable de la biosécurité/comité institutionnel de biosécurité, évaluer l'ampleur de ces problèmes et décider de la pertinence du test. Veuillez noter que ceci peut vouloir dire qu'on devra décontaminer. Même si ce n'est pas requis annuellement, les systèmes de contrôle doivent être soumis à des essais periodiques. Veuillez consulter les recommandations du manufacturier.

5.4 Matrice 8
Services et appareils de laboratoire

Matrice 8	Niveau de confinement		Services et appareils de laboratoire
	3	4
1			Vérification du dispositif antireflux d'alimentation en eau conformément à la norme CAN/CSA-B64.10-01/ B64.10.1-01(8).
2			Vérification du dispositif antireflux des autres services (gaz, etc.) afin de s'assurer que celui-ci fonctionne tel que spécifié.
3			Vérification des systèmes et de l'air comprimé respirable conformément à la norme CAN/CSA-Z180.1-00(9). Vérification du système d'alarme et de la commutation vers les systèmes de secours.
4			Vérification des équipements protecteurs personnels à pression positive (combinaisons) afin de s'assurer que ceux-ci fonctionnent tel que spécifié.
5			Vérification des douches classiques et des douches chimiques afin de s'assurer que celles-ci fonctionnent tel que spécifié. Vérification du système d'avertissement de bas niveau du réservoir de désinfectant (niveau de confinement 4).
6			Vérification de la génératrice d'urgence et de l'onduleur dans des conditions de charge appropriées afin de s'assurer que ceux-ci fonctionnent tel que spécifié.
7			Vérification des portes à verrouillage réciproque afin de s'assurer qu'elles n'ouvriront pas simultanément.
8			Vérification des systèmes de sécurité (accès contrôlé, télévision en circuit fermé) afin de s'assurer que ceux-ci fonctionnent tel que spécifié.
9			Vérification des systèmes de communication et de transfert de papier électronique (intercom, téléphone, télécopieur, etc.) afin de s'assurer que ceux-ci fonctionnent tel que spécifié.
10			Vérification des systèmes de décontamination (autoclaves, chambres de fumigation, effluents liquides) et vérification microbiologique au moyen de charges représentatives. La résistance de l'organisme choisi pour le test doit correspondre à celle des organismes qui seront vraisemblablement manipulés.
11			Pour les laboratoires de niveau 4, vérifier les siphons et la tuyauterie menant à des systèmes de traitement deseffluents(ycomprisdeséventsassociés) conformément à l'article 3.6 du Code national de la plomberie du Canada (1995) (10). La pression pour la vérification d'air sur le système de drainage correspondra aux normes du Code, soit 35 kPa (14 pouces colonnes d'eau).

Références

1. ARS Facilities Design Standards , 242.1M-ARS. Facilities Division, Facilities Engineering Branch AFM/ARS, United States Department of Agriculture, 2002

2. Testing of nuclear air treatment systems. ASME N510. American Society of Mechanical Engineers, New York, NY, 1989 (Reaffirmed 1995).

3. Class II (laminar flow) biohazard cabinetry. Standard 49. NSF International. Ann Arbor, Michigan, 2002.

4. Biological containment cabinets: installation and field testing. CSA Z316.3-95. Association canadienne de normalisation, Toronto, ON, 1995.

5. National Cancer Institute Office of Research Safety and the Special Committee of Safety and Health Experts. Laboratory safety monograph: a supplement to the NIH guidelines for recombinant DNA research. Bethesda, MD: National Institutes of Health, 1979.

6. Biotechnology – Performance criteria for microbiological safety cabinets. BS EN 12469:2000 , European Committee for Standardization (CEN), 2000.

7. Testing Cleanrooms , IEST-RP-CC006.2. Institute of Environmental Sciences and Testing (IEST). Rolling Meadows, IL, 1997.

8. Guide de sélection et d'installation des dispositifs antirefoulement/Guide d'entretien et de mise à l'essai à pied d'œuvre des dispositifis antirefoulement , CAN/CSA-B64.10-F01/B64.10.1-F01. Association canadienne de normalisation, Toronto, ON, 2001.

9. Air comprimé respirable et systèmes connexes.CAN/ CSA-Z180.1-F00. Association canadienne de normalisation. Toronto, ON, (approuvé en 2001).

10. Code national de la plomberie–Canada. Commission canadienne des codes du bâtiment et de prévention des incendies, Conseil national de la recherche, Ottawa, ON, 1995.

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